腺相关病毒将治疗性DNA传递给人类，但一些科学家担心，引入的DNA可能会产生致癌突变。图片来源：LAGUNA DESIGN

　　来源：中国科学报

　　本报讯 就在基因治疗似乎终于实现了它的承诺之际，一项研究唤起了人们对病毒载体的长期担忧——很多努力正是依赖于病毒载体将治疗基因导入患者体内。这种“载体”是腺相关病毒（AAV）的一个精简版本，人们认为它是安全的，因其几乎不会将携带的人类DNA编织到细胞染色体中，而这有可能激活致癌基因。但一项针对10年前用AAV治疗的血友病犬的研究表明，该载体很容易将其有效载荷插入宿主DNA中控制细胞生长的基因附近。

　　美国国家人类基因组研究所的基因治疗研究员Charles Venditti说，费城一个研究小组在上个月一次会议演讲中呈现的数据“是好消息也是坏消息”。通过滑入染色体而不是自由漂浮，治疗性DNA可能有更持久的益处。在近期于奥兰多举行的美国血液学会（ASH）年会上，加拿大皇后大学医学科学家David Lillicrap说，整合“发生了，实际上可能对长期表达所需蛋白质十分重要”。

　　这一发现也引发了一场关于AAV载体是否会构成不可接受的癌症风险的争论。Lillicrap说，“我们还不太清楚。”

　　另一种在一些早期基因治疗试验中使用的病毒载体，在将其载荷整合到染色体中后，在一些儿童中引发了癌症。AAV似乎是一种更安全的选择，因为由改良病毒引入的基因通常在细胞核中形成一个自由漂浮的环，称为游离体。

　　AAV载体推动了最近基因治疗成功的激增。其中包括美国食品药品监督管理局（FDA）去年批准的一种治疗小儿神经系统致命疾病脊肌萎缩的药物，和有望在今年获批的一种治疗B型凝血障碍血友病的药物。在血友病治疗中，AAV感染肝细胞，并将该器官变成制造患者所依赖的凝血蛋白的工厂。

　　然而，对AAV安全性的怀疑已经酝酿了近20年。一项研究发现，在新生小鼠中给予高剂量的AAV，可以将其遗传物质整合到动物的DNA中，并导致肝癌。许多基因治疗师认为，在新生老鼠身上的发现与成年人无关。但新的警告来自体形和年龄更大的动物——患有A型血友病的成年狗，这种病缺少一种被称为VIII因子的凝血蛋白。在9只这样的狗中，有7只AAV载体成功为其VIII因子提供了基因的替换拷贝，并恢复了该分子的稳定生产。

　　费城儿童医院基因治疗研究员Denise Sabatino在ASH年会上报告称，然而其中两只狗的血液分子水平大约在3年后进一步上升，到7~8年时达到了原来水平的4倍左右。

　　在结束试验并研究了6只狗的肝脏后，其团队发现，在每只狗的肝脏中，AAV都将VIII因子或更常见的调控序列的片段，整合到狗肝细胞基因组的许多点上，有时是影响细胞生长的基因。其中一些细胞比其他细胞分裂得更多，在一些动物身上形成多细胞囊或“克隆体”。

　　Sabatino研究小组怀疑，这些插入物激活了生长基因，解释了克隆体和两条狗血液中VIII因子水平的升高，尽管这还不能被证明。

　　对一些研究人员来说，结果是令人鼓舞的：整合水平相对较低，狗的肝脏看起来很健康，它们的VIII因子水平保持稳定。圣裘德儿童研究医院的Andrew Davidoff说，“我认为没什么太出乎意料的。”该医院赞助了首次成功的B型血友病患者基因治疗试验，试验使用了AAV载体。

　　事实上，AAV治疗性DNA的整合可以解释为什么该试验的患者在9年后凝血蛋白水平看起来稳定。相反，随着细胞分裂，游离体携带的DNA可能会随着时间推移而丢失，因为只有一个子细胞会继承替换基因。

　　但基因治疗领域的其他人担心，这种克隆体获得另一种促进生长的突变并成为肿瘤只是时间问题。“如果狗再活5年呢？”Venditti问。一些研究人员说，这样的风险不仅可能出现在肝脏，也可能出现在其他接受AAV治疗的组织中，如神经元和肌肉细胞。